小鼠肝缺血再灌注模型
1.背景介绍
肝缺血再灌注(I/R)损伤是在移植和重大肝脏手术中发生的,可能导致术后肝功能障碍。越来越多的传统中药被用于治疗肝缺血再灌注损伤。评估不同保护效果的目的是为了研究不同药物对肝脏的保护作用。
2.实验材料和方法
01 实验材料
C57小鼠(雄性,20-25g)
异氟烷(厂家:瑞沃德 货号:R510-22-10)
通用型小动物麻醉机(厂家:瑞沃德 型号:R580S)
02 造模方法
1、适应性喂养7天,小动物麻醉机混合纯氧进行麻醉。
2、在上腹正中打开腹腔,小心暴露肝脏,并游离肝门韧带,结扎肝左叶入肝血管阻断血流。0.5min后,与非阻断的右叶和中叶相比,肉眼可见血管阻断的肝叶明显变白,说明阻断成功。临时关闭覆盖腹腔,完成持续缺血1h后,重新打开腹腔,迅速取出结扎线,恢复缺血肝血流,0.5min后可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功。逐层缝合关闭腹腔,把老鼠放回笼内,再灌注6h后取材。
03 评价指标
肝大体图片,血清生化检测,HE染色 ,Tunel(荧光)检测
3.验证
肝缺血再灌注图片
血清生化检测
HE染色
(左:正常组;右:模型组)
HE染色结果:正常组肝组织细胞形态正常。模型组肝脏损伤严重,汇管区中央静脉结构异常、变形;肝细胞可见不同程度的肿胀变性、坏死,细胞质空泡化、核固缩;肝窦间隙增宽、窦内充血,肝索断裂、溶解,大量炎细胞浸润。
Tunel(荧光)检测
(左:正常组;右:模型组)
Tunel结果:DAPI以蓝光表示,Tunel(+)以绿光表示。与正常组相比,模型组肝脏出现大量的凋亡细胞,分布广泛,细胞核明显皱缩、碎裂,细胞间隙增大,肝组织损伤严重。