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血管形成实验及研究意义
供稿：恒意赛
发布时间：2024-06-11
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【背景介绍】
血管形成是肿瘤发生发展、浸润与转移的重要条件，其中肿瘤细胞自身分泌的生长因子可以诱导血管生成。恶性肿瘤通常伴有快速增长和密集的血管，抑制血管生成可以有效地阻止肿瘤组织的生长和扩散，体外血管生成实验能够模拟肿瘤的血管发生过程，并且适用于研究药物对此过程的影响。
【血管形成实验】
01 实验原理
内皮细胞保留了分裂和快速迁移的能力，可响应血管生成信号。
02 血管形成一般使用哪些细胞？
多种类型的内皮细胞均可用于本实验，包括原代细胞和永生化细胞系。常用的有“人脐静脉内皮细胞（HUVEC）”，之所以不采用静脉血管内皮细胞与动脉血管内皮细胞是因为HUVEC具有干细胞的潜能，理论上可以传代50-60次。此外小鼠3B-11细胞、小鼠SVEC4-10细胞或原代内皮细胞也可用于血管形成实验。
03 实验操作步骤
a.实验准备与材料：
实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入冰箱过夜，4℃温度，使胶缓慢融化。同样提前将枪头、EP管、96孔板放入4℃度冰箱中预冷。
b.分装：
将冻融的Matrigel进行分装，并用预冷枪头混匀，以300ul/管分装到EP管中，整个过程始终是在冰盒中进行。
c.铺胶：
将96孔板放在冰盒上，以每孔50ul把基质胶加到96孔板内，避免产生气泡，加完稍微摇晃均匀放在4℃冰箱中静置20-30min，再放入37℃细胞培养箱中1h等待凝固。
d.收集：
当内皮细胞达到80%时汇合度后准备消化，收集细胞进行计数，并按照稀释调整细胞的密度（初次实验设置细胞密度建议：3~10*10^4细胞）。
e.观察：
96孔板加入100ul的细胞悬液，做好标记后放入37℃细胞培养箱常规培养。四小时后可见血管形成。在镜下观察并拍照，时间为14~18h。结果分析。
【常见问题及解答】
1.如何正确加入基质胶？
手持移液枪垂直于96孔板内孔的正上方，将基质胶滴入孔底部，防止基质胶沾到孔壁上。若孔底部没有铺匀，可晃动孔板使其均匀铺于底部。
2.血管形成实验，应选用多大浓度的基质胶呢？
最低浓度应不低于10mg/mL，基质胶的稀释比例是6mg/mL以上。成管效果最好的是6~8mg/mL。
3.血管形成实验应选哪种凝胶基质？
内皮细胞的管形成率取决于形成基底膜样细胞外基质(ECM)表面的凝胶的类型和成分，细胞在该表面上接种。
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